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磷脂酶C(PLC)检测试剂盒(可见分光光度法)
磷脂酶C(PLC)检测试剂盒(可见分光光度法)图片
包装:50管/48样


产品介绍

磷脂酶 C(EC 3.1.4.3)是一种水解甘油磷酸酯 C3位点甘油磷酸酯键的脂类水解酶,广泛存在于微生物及动植物的组织和细胞中,在细胞代谢、细胞传递、生长发育等方面具有重要作用。

磷脂酶 C催化水解 NPPC产生对硝基苯酚,在 410nm处有特征吸收峰。

产品内容:

试剂名称规格保存条件
提取液液体 50ml×1瓶4℃
试剂一液体 55ml×1瓶4℃
试剂二液体 25ml×1瓶4℃避光
试剂三液体 20ml×1瓶4℃

需自备的仪器和用品:

天平、研钵、超速冷冻离心机、可见分光光度计、1ml玻璃比色皿、恒温水浴锅。

操作步骤:

一、酶液提取

1.组织:按照质量(g):提取液体积(ml)为 1:5~10的比例(建议称取约 0.1g,加入 1ml提取液)加入提取液,冰浴匀浆后于 4℃,10000g离心 5min,取全部上清于 4℃、100000g离心 30min,弃上清,取沉淀溶于 1ml试剂一。

2.细胞:按照细胞数量(104个):提取液体积(ml)为 500~1000:1的比例(建议 500万细胞加入 1ml提取液),冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声  3秒,间隔 7秒,总时间 3min);然后于 4℃,10000g离心 5min,取全部上清于 4℃、100000g离心 30min,弃上清,取沉淀溶于 1ml试剂一。

3.血清:直接测定。

二、测定操作


空白管测定管
样品(μL)
100
试剂一(μL)100
试剂二(μL)500500
充分混匀,37℃反应 30min
试剂三(μL)400400
充分混匀,于 1ml玻璃比色皿,蒸馏水调零,测定 410nm处吸光值,分别记为 A空白管和 A测定管,△A=A测定管-A空白管。

三、酶活计算公式

标准曲线:y=0.0191x-0.0103,R2=0.9991

(1)按照蛋白浓度计算

酶活性定义:每毫克蛋白每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/mg prot)=(△A+0.0103)÷0.0191×V反总÷(V样×Cpr)÷T=17.45×(△A+0.0103)÷ Cpr

(2)按照样本质量计算

酶活性定义:每克组织每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/g鲜重)=(△A+0.0103)÷0.0191×V反总÷(V样÷V样总×W)÷T=17.45×(△A+0.0103)÷W

(3)按照细胞数量计算

酶活性定义:每104个细胞每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。 PLC活性(nmol/min/104cell)=(△A+0.0103)÷0.0191×V反总÷(V样÷V样总×细胞数量)÷T=17.45×(△A+0.0103)÷细胞数量

(4)按照液体体积计算

酶活性定义:每毫升血清每分钟水解NPPC产生1nmol对硝基苯酚所需的酶量为一个酶活力单位。

PLC活性(nmol/min/ml)=(△A+0.0103)÷0.0191×V反总÷V样÷T=17.45×(△A+0.0103)

V反总:反应总体积,1ml;V样:加入样本体积,0.1ml;V样总:加入提取液体积,1ml;Cpr:样本蛋白浓度,mg/ml;W:样本质量,g;T:反应时间,30min。

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