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土壤几丁质酶检测试剂盒(微量法)
土壤几丁质酶检测试剂盒(微量法)图片
包装:100管/48样


产品介绍

几丁质主要存在于虾、蟹、昆虫等甲壳类动物的外壳与软体动物的器官(例如乌贼的软骨),以及真菌类的细胞壁中,而几丁质酶(EC 3.2.1.14)可催化几丁质水解,具有抵御真菌侵染的作用,成为抗真菌病害的研究热点。

几丁质酶水解几丁质产生N-乙酰氨基葡萄糖,进一步与对二甲氨基苯甲醛产生红色化合物,在585nm处有特征吸收峰,吸光值增加速率反映了几丁质酶的活性。

产品组成:

试剂名称规格保存条件
缓冲液液体8ml×1瓶4℃
试剂一液体8ml×1瓶4℃
试剂二液体4ml×1瓶4℃
试剂三液体4ml×1瓶4℃
试剂四液体10ml×1瓶4℃避光

需自备的仪器和用品:

天平、水浴锅、离心机、震荡仪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板,甲苯、蒸馏水。

操作步骤:

一、样品处理

新鲜土样风干,过40目筛。

二、测定操作表


对照管测定管
土样(g)0.02
甲苯(μL)10
混匀,25℃静置15min
缓冲液(μL)12040
试剂一(μL)
80
混匀,37℃震荡培养1h,8000rpm,4℃,离心10min,取上清100μL
试剂二(μL)4040
混匀,沸水浴7min

试剂三(μL)4040
试剂四(μL)100100
混匀,37℃水浴30min,取200μL于微量石英比色皿/96孔板中,蒸馏水调零,测定585nm处吸光值,记为A对照管和A测定管,ΔA=A测定管-A对照管。

三、计算公式

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

标准曲线:y=2.3575x-0.0143,R2=0.9989

酶活性定义:37℃条件下,每克土壤每天分解几丁质产生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。

土壤几丁质酶活性(mg/d/g)=(ΔA+0.0143)÷2.3575×V反总÷W÷T=15.264×(ΔA+0.0143)÷W

V反总:反应体系总体积,0.3ml;W:样本质量,g;T:反应时间,1/24d

b. 96 孔板测定的计算公式如下

标准曲线:y=1.1788x-0.0143,R2=0.9989

酶活性定义:37℃条件下,每克土壤每天分解几丁质产生 1mgN-乙酰氨基葡萄糖的酶量为一个酶活性单位。

土壤几丁质酶活性(mg/d/g)=(ΔA+0.0143)÷1.1788×V反总÷W÷T=30.528×(ΔA+0.0143)÷W

V反总:反应体系总体积,0.3ml;W:样本质量,g;T:反应时间,1/24d

注意事项:

1.试剂一充分混匀后再使用。

2.反应结束后立即进行比色。

3.试剂四有一定的毒性,请操作时做好防护措施。

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